Метод ПЛР: основи

Коротко: Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) — лабораторний метод, що використовується для багаторазового (у мільйони разів) збільшення найменших кількостей ДНК. Вона є основою для численних застосувань у медицині, криміналістиці та дослідженнях.

Докладніше: Метод використовує природний принцип подвоєння ДНК, що відбувається також при поділі клітин, і штучно відтворює його в лабораторії.

Подробиці

• Денатурація: Нагрівання до приблизно 95 градусів розділяє два ланцюги ДНК, і вони існують окремо.
• Зв’язування праймерів: При охолодженні короткі специфічні фрагменти ДНК, що називаються праймерами, прикріплюються до цільової послідовності, позначаючи початкову точку ампліфікації.
• Елонгація: Термостабільний фермент, що називається ДНК-полімеразою, подовжує праймери, будуючи нові комплементарні ланцюги ДНК.
• Циклічне повторення: Ці три кроки повторюються від 20 до 40 разів, що експоненційно збільшує кількість цільової послідовності.
• Термоциклери: Спеціалізовані пристрої автоматично керують точними змінами температури, необхідними для окремих кроків ПЛР.
• Діагностичне застосування: ПЛР-тести використовуються для високочутливого виявлення генетичного матеріалу патогенів, таких як віруси чи бактерії.
• Інші застосування: Метод також використовується при встановленні батьківства, криміналістичному аналізі слідів та фундаментальних дослідженнях (dna-und-rna-unterschiede, proteinbiosynthese-einfach-erklaert).